úvod · princíp testov · metodika testov · kontakty

Metodika testov

Izolácia DNA, PCR reakcia, fragmentačná analýza

DNA sa získava z odobratých buniek metódou chelexovej extrakcie po denaturácii bielkovín. Vyšetrenie polymorfizmov prebieha pomocou namnoženia (amplifikácie) príslušného úseku DNA, tzv. polymerázovou reťazovou reakciou, PCR.

Amplifikované úseky DNA (alely) sa separujú a určujú kapilárovou elektroforézou na automatickom génovom analyzátore ABI PRISM 3100 Avant, ktorý je kalibrovaný pomocou medzinárodných štandardov.

Vylúčenie resp. potvrdenie otcovstva

Pri určovaní otcovstva sa štandardne vyšetruje 16 systémov typu STR. Zo sady 16 vyšetrovaných polymorfizmov typu STR 13 znakov tvorí tzv. súbor CODIS (Combined DNA Index System), dohodnutý štandardný súbor znakov na ukladanie DNA profilu osôb, ktorý využíva FBI a ďalšie svetové kriminalistické a diagnostické laboratóriá.

V určitých prípadoch je testovanie potrebné doplniť o vyšetrenie VNTR systémov, resp. STR polymorfizmov Y-chromozómu.

Otcovstvo je vylúčené v danom systéme vtedy, ak dieťa má alelu, ktorú nemohlo zdediť od svojej matky a označený muž takúto alelu nemá. Takáto situácia však môže nastať aj v dôsledku mutácie, hoci len veľmi zriedkavo. V systémoch STR majú mutácie približnú početnosť 1:1000, preto sa otcovstvo pokladá za spoľahlivo vylúčené, ak ho vylučujú najmenej dva systémy.

Ak otcovstvo označeného muža nie je vylúčené, možno vypočítať hodnotu pravdepodobnosti otcovstva. Pri vyšetrení štandardného počtu 16 STR systémov je stanovená pravdepodobnosť otcovstva vyššia ako 99,999 % (keď je vyšetrená aj matka dieťaťa), resp. vyššia ako 99,9 % (ak matka dieťaťa nie je vyšetrená). Ak je pravdepodobnosť otcovstva nižšia ako sú uvedené hodnoty, alebo je otcovstvo vylúčené len jedným systémom, vyšetrujú sa ďalšie systémy, až kým sa nedosiahne buď vylúčenie vo viacerých systémoch, alebo dostatočne vysoká pravdepodobnosť otcovstva.

Súčasťou znaleckého dokazovania je štatistické vyhodnotenie získaných laboratórnych výsledkov, pri ktorom sa stanoví hodnota troch ukazovateľov:

1. Pravdepodobnosť vylúčenia neotca, Pv. Je to pravdepodobnosť, s akou by bolo vykonaným vyšetrením vylúčené otcovstvo muža, náhodne vybratého z populácie, t.j. neotca dieťaťa.
2. Index paternity, PI. Index udáva, koľko razy je pravdepodobnejšie, že sa kombinácia alel, ktorá sa zistila u označeného muža vyskytne u skutočného otca dieťaťa, než že sa vyskytne u muža, náhodne vybratého z populácie (neotca). Hodnota PI vyššia ako 1000 sa pokladá za významnú indíciu v prospech domnienky o otcovstve.
3. Pravdepodobnosť otcovstva označeného muža, W. Pri vyšetrení dostatočného počtu STR systémov hraničí vypočítaná pravdepodobnosť otcovstva s istotou. Úplnú istotu (t.j. pravdepodobnosť W = 100%) však nemožno dosiahnuť. Pravdepodobnosť otcovstva vyššia ako W = 99,75% sa podľa medzinárodných konvencií označuje výrazom “otcovstvo prakticky dokázané”.

Znalecký posudok

Výsledky DNA analýzy za účelom zistenia otcovstva sú po štatistickom vyhodnotení spracované vo forme znaleckého posudku a poskytnuté zadávateľovi v dvoch až štyroch vyhotoveniach aj s vyúčtovaním.